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    • 一枝蒿中一枝蒿酮酸的含量高效液相色谱法测定

      发布时间:2019/11/22 9:52:56     浏览次数:2377

      【关键词】  一枝蒿 一枝蒿酮酸 高效液相色谱法

      目的建立新疆一枝蒿中一枝蒿酮酸含量测定的方法。方法采用高效液相色谱法(HPLC),SupelcosilTMLC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液(50∶50);流速0.8 ml・min-1,柱温30℃,检测波长243 nm。结果一枝蒿酮酸和其他组分可达基线分离,线性范围0.042 4~0.212 0 μg(r = 0.999 6),平均回收率为96.4 %,方法精密度RSD=2.5%(n=3)。结论该法操作简便快速、准确灵敏,分离效果好,可为新疆一枝蒿质量控制提供方法依据。

        

        Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for determining rupestonic acid in Artemisia rupestris L. growing in Xinjiang. MethodsA SupelcosilTMLC18 column (4.6 mm×250 mm,5 μm) and mobile phase consisted of methanol-0.4% phosphoric acid solution (50:50) were used at the column temperature of 30℃. The flow rate was 0.8 ml・min-1 and detection wavelength was 243 nm.ResultsThe quantity of rupestonic acid in the range of 0.042 4~0.212 0 μg versus peak area was linear (r = 0.999 6). The average recovery was 96.4 %, and method precision was 2.8% (RSD=2.8%, n= 6). ConclusionThe method is  simple, quick, accurate, high sensitive and suitable for quality control of Artemisia rupestris L. growing in Xinjiang.

        Key words:Artemisia rupestris L.;  Rupestonic acid;  HPLC

        新疆一枝蒿Artemisia rupestris L.系菊科蒿属植物岩蒿的全草,为多年生草本,生长在海拔1 100~2 900 m的地区,分布于中国新疆、中亚和欧洲等地[1]。一枝蒿是新疆哈萨克族和维吾尔族民间传统用药,国内临床资料表明,它具有解毒、健胃消食、抗过敏、抗菌、抗病毒及保肝等功效[2~4];自古以来新疆流传着“家有一枝蒿,百病都除掉”的民间谚语,一枝蒿用于治疗毒蛇咬伤、荨麻疹、消化不良、跌打红肿、感冒发烧、咽喉肿痛等症。以一枝蒿为主药的复方制剂,已针对感冒和过敏性鼻炎等症上市销售。一枝蒿中含有黄酮类、酮酸类、氨基酸类、苷类、多糖类、挥发油类、多肽和生物碱类等化学成分[5],其中倍半萜成分――一枝蒿酮酸含量较高[6],以该化合物作为药材对照品能够较好的控制药材质量,且倍半萜类成分大多具有抗肿瘤等多种生物活性。文章建立一枝蒿酮酸的含量测定方法,简便易行,准确可靠,可为一枝蒿药材及相关产品的质量控制奠定基础。

        1  仪器与试药

        Agilent 1100高效液相色谱仪,惠普化学工作站;BS110S电子天平(德国 Sartorius);SB3200超声振荡仪(上海Branson)。一枝蒿酮酸对照品(自制,纯度99%以上);甲醇(色谱纯);95%乙醇(分析纯);磷酸(分析纯);重蒸水;一枝蒿药材购于新疆维吾尔医研究所,品种由新疆药品检验所苏来曼主任药师鉴定。

        2  色谱条件

        色谱柱为SupelcosilTMLC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液(50:50);流速0.8 ml・min-1;柱温30 ℃;检测波长243 nm。

        3  方法与结果

        3.1  溶液制备

        3.1.1  对照品溶液制备精密称取一枝蒿酮酸对照品5.3 mg,置5 ml 量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,4℃保存,临用前吸取0.2 ml置10 ml 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,制成21.2 μg・ml-1的对照品溶液。

        3.1.2  供试品溶液制备取干燥一枝蒿全草适量,研成粗粉,精密称取50 mg,置10 ml 量瓶中,加95% 乙醇适量,超声提取20 min,放置室温,添加少量95%乙醇至刻度,摇匀,静置后精密吸取2 ml置10 ml量瓶中,添加95%乙醇至刻度,进样前经0.45 μm 微孔滤膜过滤。

        3.2  系统适用性实验取含量为21.2 μg・ml-1对照品溶液进样,以一枝蒿酮酸计理论板数不低于6 000 ,峰形对称,色谱分离良好,杂质对检测无干扰。色谱图见图1。

        3.3  进样精密度实验取一枝蒿酮酸对照品溶液  4 μl分别进样5次,峰面积的RSD=1.1 %。取样品溶液10 μl分别进样5次,一枝蒿酮酸峰面积的RSD=1.8 %。

        3.4  线性关系考察精密吸取一枝蒿酮酸对照品溶液2,4,6,8和10 μl,分别进样测定,以一枝蒿酮酸峰面积对进样量(μg)进行线性回归,得方程为:Y= 3.920×103X-28.39 (r=0.999 6 )。一枝蒿酮酸在0.042 4~0.212 0 μg 范围内有良好的线性关系。

        3.5  重复性实验取同一批次样品,按“3.1.2”项下方法制备6 份样品溶液,按“色谱条件”项下方法测定,一枝蒿酮酸峰面积的RSD=2.2 %(n=6)。

        3.6  稳定性实验取供试品溶液1 份,室温放置,分别于0,2,4,6,8 h进样,测得峰面积并计算RSD=2.5 %(n= 5),说明供试品溶液在8 h内稳定。

        3.7  加样回收率实验取一枝蒿全草粉末50 mg 共3份,按“3.1.2”项下方法处理后,分别加入对照品溶液(106 μg・ml-1)0.50,0.75和1.00 ml, 按“色谱条件”项下方法操作和测定,一枝蒿酮酸回收率为96.4 %,RSD=2.5 %(n= 3)。

        3.8  样品测定分别取一枝蒿花、茎、叶和全草粉末各5份,按供试品溶液制备方法处理,吸取供试品溶液10 μl进行测定,用外标法计算一枝蒿酮酸的含量。结果见表1。表1  一枝蒿不同部位一枝蒿酮酸含量(略)

        4  讨论

        测定结果发现,一枝蒿酮酸在一枝蒿的不同部位分布不同,在花和叶中含量较高,超过了1%,而茎中含量较低,只有0.04%。一枝蒿是全草入药,其中茎的下部为木质,重量较大,因此,使一枝蒿酮酸在全草中的含量有所降低。

        一枝蒿酮酸是倍半萜类化合物,虽然结构中含有极性较大的羧基,但其水溶性却很差,易溶于乙醇、氯仿等有机溶剂,样品处理过程中水对其提取效率很低,而乙醇对其则有较好的提取效果。

        一枝蒿酮酸含量测定的色谱条件为甲醇-磷酸水溶液,峰形对称,分离度好,其他杂质对测定没有干扰,但温度对测定有着十分大的影响,当柱温上升5 ℃,则保留时间会随着测定的进行逐步提前,直至无法测定,将温度控制在30 ℃时,保留时间才能较好的稳定下来。


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