婴幼儿奶粉中5种核苷酸分析报告-标准品-技术支持-南京亚利达生物技术有限公司

发布时间：2019/10/11 14:19:46 浏览次数：1314

核苷酸是生命遗传物质RNA的基本组成单位，是体内合成核酸的前身物。婴幼儿正处在快速生长发育阶段，身体对核苷酸的需求量超过体内合成核苷酸的能力，但母乳可为婴幼儿提供所需核苷酸。而对于没有母乳喂养的婴幼儿，食用含足量核苷酸的配方奶粉，不仅可提高免疫力，也可保护婴幼儿肠胃健康。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

高效液相色谱仪，紫外检测器；

试剂材料

屈臣氏水；甲醇为色谱纯；磷酸二氢钾色谱纯；磷酸、四丁基硫酸氢铵为分析纯；

胞嘧啶核苷酸（胞苷酸）、腺嘌呤核苷酸（腺苷酸）、尿嘧啶核苷酸（尿苷酸）、次黄嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸（鸟苷酸）标准品；

高效液相色谱柱：Venusil ® C18 Plus；5μm，120Å，4.6×250mm

样品制备

5种核苷酸混合标准溶液：分别称取核苷酸标准品CMP、AMP、UMP各10mg、GMP、IMP各5mg(精确至0.1mg)，用水溶解成并定容至100mL，混匀，即得；

某品牌婴幼儿奶粉样品溶液：称取5.0g奶粉样品，用20mL热水(50~60℃)充分溶解试样，冷却至室温；用10%乙酸溶液调节pH至4.1，移至50mL容量瓶中，定容，滤纸过滤，所得滤液用0.45μm滤膜过滤，即得样品溶液。

色谱条件

色谱柱：

Venusil ® C18 Plus；5μm，120Å，4.6×250mm；

流动相：

称取1.360g磷酸二氢钾，加0.4753g四丁基硫酸氢铵至1000mL容量瓶中，用水补齐至刻度，准确加2.5ml磷酸和40mL甲醇，混匀后超声10min。（备注：由于流动相中含离子对试剂，色谱柱需要先用流动相平衡至少90min后，再运行4针标准品，系统才能稳定）

波长：254nm；

柱温：30℃；

流速：1.0mL/min；

进样量：10µL。

结果与讨论

本实验按照GB5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法，使用Venusil® C18 Plus色谱柱对5种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉样品溶液进行检测，由以下结果可知，婴幼儿奶粉样品中五种核苷酸与杂质的分离度大于1.5，回收率97%~109%，满足实验需求。

表2.5种核苷酸实验数据

图1.Venusil ® C18 Plus色谱柱5种核苷酸混标高效液相色谱图

表3.某品牌婴幼儿奶粉5种核苷酸实验数据

图2.Venusil® C18 Plus色谱柱婴幼儿奶粉样品溶液高效液相色谱图

表4.某品牌婴幼儿奶粉5种核苷酸加标实验结果

图3.Venusil ®C18 Plus色谱柱婴幼儿奶粉样品加标溶液高效液相色谱图

结论

本实验按照GB5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法，使用Venusil® C18 Plus色谱柱对5种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉样品溶液进行检测，结果表明在上述实验条件下，Venusil®C18 Plus色谱柱可用于婴幼儿奶粉中5种核苷酸的分析检测。

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